维生素E测定



概述

维生素E也叫生育酚,是一类脂溶性维生素,对于维持正常细胞结构、延缓细胞衰老和维持酶的活性非常重要。

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维生素E

邻菲罗啉比色法

鲜样




维生素E测定样品要求:

    1、鲜样:请用自封袋密封好后常温或者冰袋邮寄,请您不要遗漏样品编号或者标签。
    2、维生素E测定样品质量鲜样需样量为1g。
    3、不同的组织部位,不同的样本类型含量差异较大,具体的样本量要求,请咨询我们的技术支持人员。


测定原理:

VE在菲啰啉的存在下,可使三价铁离子还原成二价铁离子,后者在特定的环境下可与菲啰啉形成粉红色复合物,通过比色,在标准曲线上可查出VE的含量,或者通过公式可计算出VE的含量。


实验步骤:

1、样本前处理:10%匀浆上清液制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入试剂四(匀浆介质),冰水浴条件下匀浆,2500转/分离心10分钟,取上清待测。

2、组织匀浆中正庚烷维生素E的抽提(正庚烷试剂自备):

空白管 标准管 测定管
10%匀浆上清液(mL) - - 0.4
双蒸水(mL) 0.7 0.6 0.4
12µg/mL VE标准应用液(mL) - 0.1 -
无水乙醇(mL) 0.6 0.6 0.6
漩涡混匀20秒(蛋白沉淀)
正庚烷(mL) 1.2 1.2 1.2

漩涡混匀(充分抽提)1min,然后3000-4000转/分,离心5-10分钟,吸取上层正庚烷维生素E抽提液进行显色反应。

注:观察试管内液分为三层,*上层为正庚烷维生素E抽提液,第二层为水及无水乙醇,*下层为蛋白沉淀物。

3、显色反应:

空白管 标准管 测定管
VE正庚烷抽提液(mL) 0.8 0.8 0.8
试剂一(mL) 0.1 0.1 0.1
试剂二(mL) 0.05 0.05 0.05
混匀,立即记录时间,准确静置5min
试剂三(mL) 0.05 0.05 0.05
混匀(10秒左右)
无水乙醇(mL) 1 1 1

混匀,静置2min,波长533nm,光径1cm,无水乙醇调零,测定各管吸光度值。

结果计算:

维生素E结果计算

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