黄酮是指两个具有酚羧基的苯环，通过中央三碳原子连接而成的化合物。黄酮类化合物广泛存在于植物的各个部位，尤其是花、叶部位，许多研究已表明黄酮类化合物具有多种生物活性。

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黄酮	分光光度法测定	干样/鲜样

黄酮样品要求：

    1、干样：请用自封袋密封好后常温或者冰袋邮寄，请您不要遗漏样品编号或者标签。
       鲜样：新鲜、干净的植物样品，采摘样品后立即用液氮速冻，放入冻存管或用锡箔纸包起来,-80保存或干冰运输至公司。为了得到准确并符合预期的结果，尽量减少植物样品在常温下的暴漏时间。
    2、黄酮测定样品质量干样不低于1g，鲜样不低于4g。
    3、不同的组织部位，不同的样本类型含量差异较大，具体的样本量要求，请咨询我们的技术支持人员。

实验原理：

黄酮类化合物与铝盐形成配合物，该配合物在紫外可见光区有吸收，选择510nm为测定波长，芦丁作为对照品，用分光光度法测定总黄酮。

主要实验仪器：

万分之一电子天平、美国MD SpectraMax 190全波长酶标仪

试剂：

1）0.528mg/mL芦丁对照品溶液
精密称取用五氧化二磷干燥至恒重的芦丁对照品13.2mg，用60%乙醇溶解并定容至25mL。

2）60%乙醇溶液
取60mL无水乙醇于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度线。

3）5% NaNO2溶液
称取5g NaNO2溶解于水中，加水定容至100mL。

4）4% NaOH溶液
称取2g氢氧化钠于水中溶解，定容至50mL。

5）10% Al(NO3)3溶液
称取2.5g Al(NO3)3溶于水中，并定容至25mL。

实验步骤：

1）样品提取
取待测样品，研细，精密称取约0.2g，用60%乙醇回流提取2次（每次用20mL）过滤，滤液合并后蒸干，用60%乙醇溶解并定容至25mL。

2）标准曲线绘制
精密量取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6mL到10mL容量瓶中，各加入60%乙醇至2.0mL，加入0.5mL 5% NaNO2溶液，放置6min后再加入0.5mL 10% Al（NO3)3溶液，摇匀，放置6min后加入4mL 4% NaOH溶液，用60%乙醇定容至标线，摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光度，以吸光度为横坐标，芦丁含量为纵坐标，绘制标准工作曲线。

3）样品测定
精密量取样品溶液1mL，置于10mL容量瓶中，按照标准工作曲线绘制的方法，自加入0.5mL 5% NaNO2溶液起往后测定吸光度，从标准工作曲线上查得样品溶液中芦丁的含量，计算求得样品中总黄酮的含量。

结果计算：

式中：
C——从标准曲线查得黄酮的含量，μg；
N——稀释倍数；
Vt——提取液总体积，mL；
Vs——测定取液量，mL；
0.001——将μg换算为mg；
m——样品称重量，g。