上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
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货号：UPLC-MS-4228
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规格：50T/24S
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可见分光光度法
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产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称
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规格
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保存条件
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试剂一
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液体 35 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体 60 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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滤纸条
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50 mg×50 条
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常温保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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溶液的配制：
1. 滤纸条：常温防潮保存。
2. 标准品：10mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。
产品说明：
纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖一类酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系。以不溶性纤维素如滤纸为底物测定的纤维素酶称为滤纸酶，研究滤纸酶活力对纤维素酶总体酶活力的研究的有着重要意义。FPA 水解滤纸产生还原糖，还原糖与 3,5 -二硝基水杨酸反应生成在 540 nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定 540 nm 处吸光值变化可计算得 FPA 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、超声破碎仪、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管（2 mL）。
操作步骤
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照质量（g）﹕蒸馏水体积(mL)为 1﹕5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于 4℃，12000 rpm 离心 10 min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管中，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量（104 个）﹕蒸馏水体积（mL） 为 500~1000﹕1 的比例（建议 500 万细胞或细菌加入 1 mL 蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 300 w， 超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 min）；然后 4℃，12000 rpm 离心 10 min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。（若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定）
二、测定步骤
1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 540 nm，蒸馏水调零。
2、 将 10 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2 mg/mL 的标准溶液备用。
3、 标准品稀释表
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序号
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稀释前浓度（mg/mL）
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标准液体积（µL）
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蒸馏水体积（µL）
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稀释后浓度（mg/mL）
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1
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10
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200
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1800
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1
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2
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1
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400
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100
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0.8
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3
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1
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300
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200
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0.6
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4
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1
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250
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250
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0.5
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5
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1
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200
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300
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0.4
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6
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1
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150
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350
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0.3
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7
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1
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100
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400
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0.2
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实验中每个标准管需200µL标准溶液。
4、 取 200 μL 样本沸水浴 10 min（盖紧，防止水分散失），放置常温后作为对照管。
5、操作表：(在 2 mL 离心管中操作，其中对照管与测定管用有滤纸的 EP 管，空白管与标准管无需滤纸)
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试剂名称（µL）
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对照管
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测定管
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标准管
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空白管
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煮沸样本
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200
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-
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-
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-
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样本
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-
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200
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-
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-
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每支EP 管中放入一个卷状滤纸条（注意要放入底部），作为底物。
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-
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-
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标准溶液
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-
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-
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200
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-
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蒸馏水
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-
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-
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-
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200
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试剂一
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500
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500
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500
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500
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混匀，50℃水浴锅中准确反应 30 min
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-
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试剂二
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800
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800
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800
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800
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混匀，沸水浴 5 min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，测定 540nm 处吸光值 A，分别记为 A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空白管只需检测 1-2 次。
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三、FPA 活性计算
1、 标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
2、 FPA 活性的计算：
(1) 按蛋白浓度计算
酶活定义：每 mg 蛋白每分钟分解滤纸产生 1 mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
FPA 酶活（U/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr ）÷T =0.0333x÷Cpr
(2) 按样本质量计算
酶活定义：每g 样品每分钟分解滤纸产生 1 mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
FPA 酶活（U/g 质量）=x×V 提取÷W÷T =0.0333x÷W
(3) 按照细胞或细菌数量计算
酶活定义：每 104 个细胞每分钟分解滤纸产生 1 mg
生化检测
液相（HPLC）检测
