上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
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货号：UPLC-MS-4117
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规格：100T/96S
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微量法
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货号：UPLC-MS-4116
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规格：50T/48S
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可见分光光度法
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产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体 400 mL×1 瓶（自备）
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2-8℃保存
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提取液二
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液体 100 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂一
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粉剂×2 瓶
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2-8℃保存
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试剂二
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液体 10 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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2-8℃保存
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溶液的配制：
1、 提取液一：80%乙醇 400 mL，即将 320 mL 无水乙醇和 80 mL 蒸馏水混合，自备。提供一个 125 mL 空瓶。
2、 标准品：10 mg 葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。
3、 工作液的配制：取一瓶试剂一中加入 2.5 mL 试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌； 用不完的试剂可以 2-8℃保存一周。
产品说明：
纤维素是由β-D-葡萄糖单元以 β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。
纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。
*低检出限：0.0037 mg/mL
线性范围：0.00391-0.3 mg/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。
操作步骤
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 细胞壁物质（CWM）的提取：
（1） 称取约 0.3g（记为 W1）样本，加入 1mL 提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴 20min，冷却至室温，6000g， 25℃离心 10min，弃上清。
（2） 沉淀先后用 1.5mL 提取液一和丙酮各洗两遍（涡旋振荡 2min 左右，6000g，25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁。
（3） 在粗细胞壁中加入 1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡 15 小时，6000g，25℃离心 10min，弃上清，将沉淀用蒸馏水清洗两遍（涡旋振荡 2min 左右，6000g，25℃离心 10min，弃上清即可），之后干燥沉淀（60-100℃ 均可），得到细胞壁物质（CWM），称重记为 W2。
2、 纤维素的提取：
（1） 称取烘干的CWM 约 5mg（记为 W3），加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至 EP 管中，用蒸馏水定容至 0.5mL。
（2） 将定容后的匀浆液置于冰水混合物中，缓慢加入 0.75mL 浓硫酸，缓慢混匀，冰水浴中静置 30min。8000g， 4℃离心 10min，取上清液，用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
注意：1. 若样本或者干燥后的沉淀质地坚硬，可以先研碎再进行后续步骤
2. 在提取纤维素的过程中，首先，置于冰水浴中的 EP 管需要固定，不要上下左右浮动，一方面保障自身安全，另一方面防止冰水混合物进入 EP 管造成试验误差；再者，加入浓硫酸时，建议枪头伸入样本液面以下， 缓慢加入，防止液面沸腾及样本碳化。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 将10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078、0.0039mg/mL的标准溶液备用。
3、 标准品稀释表
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序号
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稀释前浓度（mg/mL）
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标准液体积（µL）
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蒸馏水体积（µL）
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稀释后浓度（mg/mL）
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1
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10
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100
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900
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1
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2
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1
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50
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350
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0.125
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3
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0.125
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200
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200
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0.0625
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4
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0.0625
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200
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200
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0.03125
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5
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0.03125
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200
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200
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0.015625
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6
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0.015625
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200
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200
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0.0078
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7
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0.0078
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200
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200
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0.0039
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实验中每个标准管需150µL标准溶液。
4、 操作表 (在1.5 mL离心管中) ：
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试剂名称（µL ）
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测定管
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标准管
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空白管
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样本
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150
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-
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-
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标准溶液
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-
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150
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-
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蒸馏水
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-
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-
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150
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工作液
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35
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35
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35
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浓硫酸
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315
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315
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315
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三、纤维素含量计算
1、标准曲线的绘制：根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，ΔA）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）
2、纤维素含量的计算：
（1） 按样本质量计算
纤维素（mg/g 质量）=x×V 提取×20× （W2÷W3 ）÷W1÷1.11=22.52×x×W2÷W3÷W1
（2） 按样本细胞壁物质（CWM）质量计算
纤维素（mg/g 干重）=x×V 提取×20÷W3÷1.11=22.52x÷W3
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为纤维素含量的常数，即111 µg 葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100 µg纤维素蒽酮试剂所显示的颜色；V提取：纤维素提取液体积，1.25 mL（0.5 mL蒸馏水+0.75 mL浓硫酸）；20：样本稀释倍数；W1：样本质量，0.3 g；W2：样本细胞壁物质（CWM）质量，g；W3，提取纤维素时称取的细胞壁物质（CWM） 质量，g。
注意事项
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时各个步骤均需特别注意：纤维素提取在加入浓硫酸时，建议枪头伸入样本液面以下，缓慢加入，以防止液体飞溅烧伤；95℃水浴结束取出后需冷却至室温再打开EP管盖，以防液体飞溅烧伤。
3、 由于试剂二挥发性强且具有刺激性气味，建议在通风橱中进行工作液的配制
生化检测
液相（HPLC）检测
