上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4525	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4524	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水混匀，-20℃分装保存两周，避免反复冻融；

2、 显色液：临用前按照实验所需用量按 A 液：B 液=1:1 充分混匀，现配现用；

3、 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。

产品说明：

一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水， 具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，作为一种新型的生物信使分子，在细胞间及细胞内发挥传递信号的作用。其广泛分布于生物体内各组织中，特别是神经组织中。在机体神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中也起着十分重要的作用。

NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO -和NO -，本法利用硝酸还原酶特异性将NO -还原成NO -，在酸性条件下，NO -与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。

技术指标：

*低检出限：0.00074 μmol/mL

线性范围：0.00078-0.25 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织样本：按质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10 比例（建议称取 0.2g 样本，加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于 4℃，12000rpm，离心 15min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

2. 细胞样本：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000 : 1 的比例（建议 1000 万细胞加入 1.0mL 提取液） 加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），然后于 4℃，12000rpm， 离心 15min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

3. 液体样本：直接测定。若液体有浑浊则离心取上清测定。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 将试剂一置于冰上备用。

3．标准液的稀释：将标准品用蒸馏水倍比稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL标准液。

4. 标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需100µL标准溶液。

5. 操作表（在0.6mL EP管中操作）
三、NO 含量计算

1. 标准曲线的绘制：