中性蛋白酶(NP)活性检测试剂盒-中性蛋白酶(NP)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4477 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4476  规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 55mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂二

粉剂×1

4℃保存

试剂三

液体 20mL×1

4℃保存

试剂四

液体 4mL×1

4℃保存

标准品

液体 1mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前加入 4mL 蒸馏水,充分溶解。

2 试剂二:临用前加入 4mL 提取液,沸水浴中搅拌溶解。

3 标准品:20μmol/mL 标准酪氨酸。

产品说明:

NP 在一定的温度和中性 pH 条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点, 中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。中性条件下,NP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心 10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取 0.1g 酶制品,加入 1mL 提取液,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

2 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。

3 标准溶液的配制:临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL标准溶液使用,现用现配。

4 样本测定 (1.5mLEP管中分别加入下列试剂) :

试剂名称(µL

对照管

测定管

空白管

标准管

粗酶液

20

20

 

 

试剂一

40

 

试剂二

 

40

混匀后30℃水浴保温10min

试剂一

 

40

试剂二

40

 

混匀后10000rpm 4℃离心10min,取上清

上清

40

40

 

 

蒸馏水

 

 

40

 

标准品

 

 

 

40

试剂三

200

200

200

200

试剂四

40

40

40

40

混匀后30℃水浴保温20min。取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。并计算ΔA测定=A测定管-A对照管、ΔA标准=A标准管-A空白管

三、NP活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

NP 活性(U/mg prot)=C 标准品×ΔA 测定÷ΔA 标准×V1÷(Cpr×V2)÷T =0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr 

2、按样本质量计算

酶活单位定义:30℃每克样本每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

NP 活性(U/g 质量)=C 标准品×ΔA 测定÷ΔA 标准×V1÷(W×V2÷V3)÷T =0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

C 标准品:标准酪氨酸溶液浓度,0.25 μmol/mL;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V1 酶促反应总体积,0.1mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,20µL=2×10-2 mL;V3:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min。

注意事项:

若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,*后计算酶活时对公式进行修改。


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