组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒-组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)试剂盒



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货号:UPLC-MS-4427 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4426 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 15 mL×1

4℃保存

标准液

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1、标准液:10 μmol/mL  酚标准液,临用前蒸馏水稀释至 2.5μmol/mL 备用。

产品说明:

AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物, 510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 离心 10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。

二、操作步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。

2 操作表:

试剂名称(μL

测定管

对照管

空白管

标准管

蒸馏水

-

-

4

-

标准品

-

-

-

4


上清液

4

-

-

-

试剂一

40

40

40

40

试剂二

40

40

40

40

混匀后置于37℃水浴中保温15min

试剂三

120

120

120

120

上清液

-

4

-

-

混匀后于510nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。

三、AKP/ALP活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP 酶活(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP 酶活(U/g 质量)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

3、按液体体积计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP 酶活(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准品:标准品浓度,2.5μmol/mL;V样:加入反应体系中上清液体积,0.004mL;T:反应时间,15min;V提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。

注意事项:

1 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。

2 试剂三变蓝绿色后不能再使用。

3 加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。


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