组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒-组织及血液酸性磷酸酶(ACP)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4425 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4424 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 30 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 12 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 12 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 35 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、标准品:10 μmol/mL 酚标准液,临用前蒸馏水稀释至 0.625μmol/mL 备用(可以吸取 20μL 10 μmol/mL 酚标准液和 300μL 蒸馏水混合备用),稀释后的标准液 2-8℃保存一周。

产品说明:

ACP 在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP 常用于前列腺癌的辅助诊断。

在酸性环境中,ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510nm 吸光度增加速率,来计算ACP 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织样本称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃,10000rpm 离心 10min,取上清液待测。血清(血浆):血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用提取液稀释。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 510nm,蒸馏水调零。

2、试剂一置于 37℃水浴中预热 30min 以上。

3、操作表:

试剂名称(μL

测定管

对照管

空白管

标准管

蒸馏水

-

-

100

-

标准品

-

-

-

100

上清液

100

-

-

-

试剂一

200

200

200

200

试剂二

200

200

200

200

混匀后置于 37℃中保温 15min

试剂三

600

600

600

600

上清液

-

100

-

-

混匀后于 510 nm 测定吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 空白管、A 标准管。空白管和标准管只需做 1-2 次。

三、ACP 活性计算

1、按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 酶活 (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样]÷(Cpr×V 样)÷T=0.0417×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 酶活 (U/g 质量)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷(W÷V 提取×V 样)÷T=0.0417×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

3、按血液体积计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。

ACP 酶活 (U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷V 样÷T=0.0417×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

C 标准品:标准品浓度,0.625μmol/mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白浓度,

mg/mL;T:反应时间,15min;V 提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。

2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。

3、加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。

4、ACP 不稳定,尤其在 37℃ pH 大于 7 的条件下活力丧失快,因此酸性磷酸酶样本一般需当天准备;血清样本中,每毫升血清中加入 10mg 柠檬酸氢二钠或者 5mg 硫酸氢钠,使 pH 降至 6.5 以下,或 5mL 血清加入 30% 醋酸溶液 2~3 滴,置于 4℃可保存 1 周。


上一篇:组织铁含量检测试剂盒-组织铁检测试剂盒-上海液质
下一篇:组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒-组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)试剂盒

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324