组织铁含量检测试剂盒-组织铁检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4616 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4615 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 55 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×2

4℃保存

试剂二

粉剂×2

4℃保存

标准液

液体 3 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前配制,加入 7.5 mL 蒸馏水充分溶解,试剂一变黑后则不能使用;

2 试剂二:临用前配制,加入 375 μL 冰醋酸,加入 12 mL 蒸馏水充分溶解;溶解后 4℃保存一周;

3 标准液:1 μmol/mL Fe3+标准液。临用前稀释 8 倍即 0.125 μmol/mL 的标准溶液进行实验,现用现配。

产品说明:

铁是人体必须的微量元素之一,它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分,帮助氧的运输,促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱,并影响机体的免疫功能。

亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+,Fe2+进一步与2, 2’-联吡啶显色,在520nm处有吸收峰,测定该波长吸光度即可计算铁含量。

技术指标:

*低检出限:0.00009449 μmol/mL

线性范围:0.0039-0.25 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。4000g 4℃离心 10 分钟,取上清。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计预热30min,波长调至520nm。蒸馏水调零。

2. 加样表:

加入试剂(μL

空白管

测定管

标准管

蒸馏水

400

-

-

0.125μmol/mL标准液

-

-

400

样本

-

400

-

试剂一

200

200

200

试剂二

400

400

400

混匀后盖紧,置于沸水浴5min,自来水冷却;加入200μL氯仿(自备),充分震荡混匀;室温10000rpm 离心10min,小心吸取上层液800μL,加入1mL玻璃比色皿,于520nm立即测定吸光度,分别记为A空白管、A 测定管、A标准管,计算ΔA标准=A标准管-A空白管,ΔA测定=A测定管-A空白管。

三、组织铁含量计算

1.按组织质量计算

组织铁含量(μg/g 质量)=(C标准液×ΔA测定÷ΔA标准)×V提取×55.845÷W=6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W 

2.按组织蛋白浓度计算

组织铁含量(μg/mg prot)=(C标准液×ΔA测定÷ΔA标准)×V提取×55.845÷(Cpr×V提取)=6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

C标准液:0.125μmol/mL Fe3+标准液;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL;55.845 Fe的相对分子质量,55.845μg/μmol。

注意事项:

1 ΔA大于0.9时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。

2 试剂一溶解变黑后则不能使用;试剂二有毒性,做好防护措施。


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