产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称
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规格
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保存条件
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试剂一
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液体 120 mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂二
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粉剂×1 瓶
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4℃保存
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溶液的配制：
试剂二：临用前加入 2.5 mL 丙酮溶解。
产品说明：
LAP是一种膜结合酶，广泛存在于肝、胆、胰等组织中，参与组织蛋白和某些肽类的降解更新。各类肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作为各类肝病的一项初步检测指标，特别是肝癌鉴别诊断的指标。
LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有*大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 加样表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂
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试剂名称（μL）
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测定管
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空白管
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试剂一
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10
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样本上清
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10
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试剂一
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170
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170
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试剂二
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20
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20
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在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入上述试剂，充分混匀后于405nm处测定30s时的吸光值A1，迅速置于37℃水浴3min（有控温功能的酶标仪可以将温度调至37℃），拿出迅速擦干测定210s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。
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三、LAP酶活计算
A、按微量玻璃比色皿计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样×Cpr) ÷T=675.4×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
单位的定义：每g组织每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(W× V样÷V样总) ÷T=675.4×ΔA÷W
3、按细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细胞每分钟生成1 nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。LAP（U/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.35×ΔA
4、按液体体积计算：
单位的定义：每mL血液每分钟生成1nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷V样÷T=675.4×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.87×103L/mol/cm；109：单位换算系数， 1mol=109nmol；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入试剂一体积，1mL；T：反应时间，3min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞总数，500万。
B、按96孔板计算：
将上述计算公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。
注意事项：
1、ΔA大于0.5时或者A值大于1.5时建议将样本上清用试剂一稀释后再进行测定。
2、空白管的ΔA变化小于0.01。
生化检测
液相（HPLC）检测
