上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
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货号：UPLC-MS-4483
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规格：100T/48S
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微量法
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货号：UPLC-MS-4482
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规格：50T/24S
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紫外分光光度法
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产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体 50 mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂一
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粉剂×1 瓶
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4℃保存
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试剂二
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液体 15 mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂三
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粉剂×1 瓶
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4℃保存
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溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入 10 mL 试剂二，充分溶解；
2、 试剂三：临用前加入 10 mL 蒸馏水，充分溶解。
产品说明：
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆或者 0.1mL 胃液加入 0.9mL 提取液。10000rpm 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至275nm，蒸馏水调零。
2、 操作表：
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试剂名称（μL）
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测定管
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对照管
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样本
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20
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-
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试剂一
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100
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100
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混匀，37℃保温 10min。
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试剂三
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100
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100
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摇匀 1min。
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样本
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-
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20
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混匀后10000rpm 4℃ 离心10min，取上清用微量石英比色皿/96 孔UV 板测定A275nm。计算∆A=A
测定-A 对照。
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注意：对照管后加样本，而测定管先加样本三、胃蛋白酶活性计算
A、用微量石英比色皿
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mg prot）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T=0.786×∆A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T=0.786×∆A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mL）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T= 7.86×∆A
Cpr：样本蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 液：液体体积，0.1mL；ε： 酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，1cm。
B、用 96 孔 UV 板
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mg prot）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T = 1.31×∆A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T =1.31×∆A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mL）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T =13.1×∆A
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 液：液体体积，0.1mL；ε： 酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，0.6cm。
生化检测
液相（HPLC）检测
