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试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液一
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液体 110mL×1 瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液体 0.6mL×2 支
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-20℃保存
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试剂一
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液体 5μL×2 支
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2-8℃保存
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试剂二
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液体 5μL×2 支
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2-8℃保存
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试剂三 A
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液体 25mL×1 瓶
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2-8℃保存
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试剂三 B
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粉剂×2 瓶
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-20℃保存
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试剂四
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液体 5mL×1 瓶
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2-8℃保存
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溶液的配制：
1、 试剂一：临用前取 1 支先将液体甩离至管底，然后加入 125μL 试剂四，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；
2、 试剂二：临用前取 1 支先将液体甩离至管底，然后加入 125μL 试剂四，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；
3、 试剂三：临用前取 1 瓶试剂三 B 加入 12mL 试剂三A，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；
4、 工作液：临用前将试剂一、二和三按照 1:1:90 的比例混合，根据样本量现配现用。
产品说明：
乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物，在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸、酮体、胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD+生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
紫外分光光度计/酶标仪、天平、水浴锅/恒温培养箱、台式低温离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：建议称取约 0.1g 样本，加入 0.99mL 提取液一和 0.01mL 提取液二进行冰浴匀浆。于 4℃，8000g 离心10min，取上清，置于冰上待测。
2. 细胞或细菌：建议取 500 万细胞或细菌加入 0.99mL 提取液一和 0.01mL 提取液二，冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 200w，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），于 4℃，8000g 离心 10min，取上清，置于冰上待测。
3. 血清（浆）或其他液体：直接检测，若液体有浑浊则离心后测定。
二、测定步骤
1. 紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 将工作液37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）预热10min。
3. 取50μL样本和205μL工作液至微量石英比色皿或96孔UV板，混匀，立即记录340nm处20s的吸光值A1和80s时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
三、乙酰辅酶 A 含量计算
A、使用微量石英比色皿测定
1. 按样本质量计算
乙酰辅酶A 含量（nmol/g 质量）＝(ΔA÷ε÷d)×V 反×109÷V 样×V 提÷W×F=819.9×ΔA÷W×F
2. 按照细胞数量计算
乙酰辅酶A 含量（nmol/104 cell）＝(ΔA÷ε÷d)×V 反×109÷V 样×V 提÷500×F=1.640×ΔA×F
3. 按液体体积计算
乙酰辅酶A 含量（nmol/mL）＝(ΔA÷ε÷d)×V 反×109÷V 样×F=819.9×ΔA×F
ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；109：单位换算系数，1mol=109nmol；V 反：反应总体积，2.55×10-4L；V 样：加入样本上清体积，0.05mL；V 提：加入提取液一和提取液二的总体积，1mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌数量，500 万；F：稀释倍数。
B、使用 96 孔 UV 板测定
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔UV板光径）进行计算即可。
生化检测
液相（HPLC）检测
