产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称
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规格
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保存条件
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提取液
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液体 100mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂一
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液体 40 mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂二
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粉剂×1 瓶
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4℃保存
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试剂三
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液体 20 mL×1 瓶
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4℃保存
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标准品
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粉剂×1 支
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4℃保存
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溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入 20mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；
2、标准品：10mg 葡萄糖，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用。
产品说明：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据*适 pH，将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。NI 主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算 NI 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、 标准品的制备：将标准液用蒸馏水稀释为 2、1.5、1.0、0.5、0.25、0mg/mL 葡萄糖标准液
3、 操作表（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）
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试剂名称（μL）
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测定管
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对照管
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标准管
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样本
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50
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50
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-
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试剂一
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200
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-
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试剂二
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200
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200
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标准液
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-
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-
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50
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混匀， 37℃准确水浴30min后，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），12000 g，4℃离心5min，取上清。
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上清
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200
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200
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200
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试剂三
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125
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125
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125
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混匀，煮沸 10min 左右（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96
孔板中，540nm 处记录各管吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照。
三、NI 活性计算
1、标准曲线的建立：
以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0mg/mL）的吸光度为y轴，葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA带入方程得到x（mg/mL）。
2、NI活性计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1µg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性（U/mg prot）=(x×V1×1000)÷(V1×Cpr)÷T=33.3 ×x÷Cpr
（2） 按样本质量计算
单位定义：37℃每g组织每分钟产生1µg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性（U/g 质量）=(x×V1×1000)÷(W×V1÷V2)÷T=33.3 ×x÷W
1000：单位换算系数，1 mg/mL =1000µg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，
1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间：30min。
注意事项：
1. 如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；
2. 如果吸光值大于 1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。
3. 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
生化检测
液相（HPLC）检测
