上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4397	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4396	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：自备异丙醇。

2. 标准品：10 mg 胆固醇，临用前加入 517 μL 提取液，振荡溶解，即为 50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液，2-8℃ 可保存 4 周。

3. 试剂三：液体置于试剂瓶内EP 管中。

4. 工作液的配制：根据样本量将试剂一：试剂二：试剂三按 3 mL：20 μL：3 μL（约 16T）的比例配制工作液， 现用现配。

产品说明：

总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。

利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成4-胆甾烯酮和H2O2；*后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。

技术指标：

*低检出限：0.143 μmol/mL

线性范围：0.156-5 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、蒸馏水、异丙醇。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌/细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min， 取上清置于冰上待测。

3. 血清（浆）等液体样本：直接测定。若有沉淀请离心后取上清待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 标准溶液的稀释：将50μmol/mL胆固醇标准溶液用提取液进行稀释得到2.5、2、1.25、0.625、0.3125、0.15625μmol/mL的标准溶液备用。

3. 标准溶液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需20µL标准溶液。

4. 在1.5mLEP管/96孔板按下表步骤加样：

三、总胆固醇含量计算

1. 标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA 测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。

2. 总胆固醇含量的计算：

（1） 按血清（浆）等液体体积计算：TC含量（μmol/dL）=x×100

（2） 按样本蛋白浓度计算：TC含量（μmol/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V 提取）=x÷Cpr

（3） 按样本质量计算：TC含量（μmol/g 质量）=x×V 提取÷W=x÷W

（4） 按细胞/细菌数量计算：TC含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x